Что такое бактериологическая лаборатория. Помещение бактериологической лаборатории. Правила работы и поведения в лаборатории

фото с сайта lentachel.ru

Всего сто лет назад заражение во время научных исследований считалось практически неизбежным. Многие учёные подвергали свой организм смертельному риску, изучая микробы и бактерии, о природе которых мало что знали. Сегодня большинство опасных микроорганизмов, окружающих нас, описаны и изучены, более того, предусмотрены специальные медицинские изделия для бактериологических лабораторий, использование которых с 99% вероятностью защищает исследователей от любых профессиональных рисков.

Все объекты, с которыми работают сотрудники бактериологической лаборатории, насыщены патогенной микрофлорой. Чтобы поддерживать в помещении здоровую среду, избежать прямого контакта с заражённым материалом, применяют мебель, одежду и посуду с усиленными барьерными и противомикробными свойствами.

Герметично закрываемые застеклённые и металлические шкафы и боксы, удобные для дезинфекции лабораторные столы, стерилизационная и автоклавная техника, и запирающийся рефрижератор - предметы, обеспечивающие безопасность людей, проводящих исследования инфицированных образцов.

Вся посуда, применяемая для хранения проб: колбы, градуированные стаканы, - герметично закрываются, чтобы избежать распространения микробов в воздухе лаборатории.

Для изготовления ёмкостей задействуют особое небьющееся стекло или пластик повышенной прочности. Двойные стенки, особая устойчивая форма дна, резиновые элементы на крышках, подносы и кюветы создают наилучшие условия для изоляции таких опасных соседей, как менингококки, стрептококки, стафилококки, бациллы и клостридии.

Перед началом исследований персонал надевает специальную одежду: защитный халат, маску, очки. Для работы с очень опасными веществами применяют прорезиненные фартуки или специальные халаты с влагоотталкивающей пропиткой.

Правильная своевременная обработка воздуха ультрафиолетовыми облучателями и бактерицидными лампами, использование проверенных модификаций моечной, снабжение всех сотрудников полным комплектом защитной одежды - общепринятый стандарт, отступление от которого административно, а в случае тяжёлых последствий и уголовно наказуемо.

Комплексное оснащение и реализация всех мер предосторожности помогают сберечь здоровье сотрудников, снизить профессиональную заболеваемость, обеспечить высокую результативность исследований: замечено, что применение надёжных, проверенных средств защиты снижает тревожность, способствует более быстрым и эффективным действиям.

ТЕМА ЗАНЯТИЯ : Бактериологическая лаборатория и правила работы в ней. Классификация микроорганизмов. Морфология бактерий. Методы определения вида микробов. Бактериоскопический метод. Техника микроскопирования с иммерсионной системой.

УЧЕБНАЯ ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ : Ознакомиться с устройством бактериологической лаборатории и правилами работы в ней. Ознакомиться с принципами классификации микроорганизмов. Изучить морфологические признаки бактерий и методы определения вида микробов. Освоить бактериоскопический метод исследования и технику микроскопирования с иммерсионной системой.

ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ :

1. Ознакомиться с устройством бактериологической лаборатории и правилами работы в ней.

2. Познакомиться с принципами классификации микроорганизмов.

3. Изучить морфологические признаки бактерий и методы определения вида микробов.

4. Освоить технику микроскопирования с иммерсионной системой.

Устройство бактериологической лаборатории

Бактериологическая лаборатория предназначена для исследования материалов, содержащих возбудителей бактериальных инфекций, для определения санитарно-микробиологических показателей, контроля состояния и напряженности специфического иммунитета и других микробиологических исследований. Бактериологическая лаборатория должна размещаться в изолированных от других лабораторий помещениях с необходимым оборудованием и мебелью. Лаборатория должна иметь отдельный вход, гардероб и душевую. В состав бактериологической лаборатории должны входить следующие помещения:

Комната приема и регистрации материалов;

Боксированные помещения для микробиологических исследований;

Автоклавная;

Моечная;

Виварий.

Комнаты для микробиологических исследований оборудуют термостатами, холодильниками, центрифугами, весами, водяными банями, электромагнитными мешалками. На столах размещают необходимую аппаратуру. Работу с инфицированным материалом проводят в боксе с предбоксником . У входа в бокс должен быть коврик, пропитанный дезраствором. В боксе разбирают поступившие пробы, готовят и фиксируют мазки-отпечатки, проводят посевы микроорганизмов на питательные среды. Поэтому в боксе располагают столы, на которых размещают необходимые для работы инструменты: емкости с дезрастворами для использованной посуды, штативы для пробирок, пробирки и чашки Петри с питательными средами, стерильные пипетки, ступки и т. д. В предбокснике в биксах необходимо иметь стерильные халаты, шапочки, маски, а также в предбокснике должна быть сменная обувь. В предбокснике можно размещать термостаты, холодильники, центрифуги и другое оборудование. В боксах и предбоксниках ежедневно проводят влажную уборку, дезинфекционную обработку и облучение с помощью бактерицидных ламп в течение 30-40 минут перед началом работы и после работы.

В автоклавной необходимо иметь два автоклава: один автоклав для чистых материалов (для стерилизации посуды, питательных сред, инструментов); другой автоклав для инфицированных материалов (для обезвреживания инфицированных инструментов и материалов).

Моечная предназначена для мытья посуды. Посуду, пипетки и инструменты, загрязненные инфицированным материалом, моют только после стерилизации. В ней размещают сушильные шкафы.

Виварием называется помещение, используемое для содержания лабораторных животных. В виварии необходимо иметь карантинное отделение, комнаты для экспериментальных и здоровых животных, помещения для мытья и дезинфекции клеток, инвентаря и спецодежды, кухню для приготовления корма, кладовую, фуражную, трупосжигательную печь. Все помещения вивария должны быть изолированы друг от друга.

Оснащение бактериологической лаборатории должно отвечать требованиям эффективности и безопасности. Если речь идет о специализированных учреждениях, то они укомплектоваются устройствами, которые соответствуют задачам учреждений, а также выполняют контролирующие функции. В них применяется оборудование, которое позволяет сотрудникам проводить исследования в научных интересах или с медицинскими целями: уточнить, поставить диагноз, провести профилактику.

3.1. Принцип идентификации микроорганизмов в MALDI BioTyper.

Быстрое действие установки обеспечивает высокую скорость работы. Для выполнения одной операции требуется несколько минут. Линейка аппаратов MALDI BioTyper представлена разными технологическими приборами для выполнения специальных задач.

3.2. Устройство бактериологической лаборатории на базе времяпролетного масс-спектрометра.

MALDI BioTyper расширяет возможности оснащения бактериологической лаборатории, в которой оборудованы рабочие зоны:

«грязная» - помещения приема и регистрации анализов, посевные комнаты;

«рабочая» - микробиологические анализаторы;

«чистая» - автоклавная и стерилизационные, средоварочные, боксы;

зона «санитарной микробиологии».

Научно-производственная фирма ЛИТЕХ предоставляет два варианта комплектации:

«Стандарт» и «Стандарт+». Модели и количество приборов изменяются в зависимости от пожеланий заказчика.

Базовым прибором в комплекте «Стандарт» является масс-спектометр Microflex, предназначенный для анализа малых молекул и полимеров. Быстрый и точный прибор идеально подходит не только для микробиологических исследований, но и таких областей, как клиническая протеомика и функциональная геномика.

В комплектацию «Стандарт» входит следующее оборудование для бактериологической лаборатории:

CO2 инкубатор на 170 литров, с диапазоном рабочих температур от +5°С до +50°С;

Анализатор культур крови;

Расходные материалы для анализатора гематологических культур: контейнеры, стойки, газогенерирующие пакеты;

Бидистилятор без накопителя, производительностью 8 литров в час;

Электронные весы;

Настольные центрифуги двух моделей: 5702R Eppendorf, Z 206 А Hermle Labortechnik;

Инкубатор общего назначения;

Автоклавы с горизонтальной, вертикальной загрузкой;

Электрическая настольная плитка;

Автоматическая средоварка;

Водяная баня со встроенной мешалкой;

Микропроцессорный pH-метр с автоматической калибровкой и автотермокомпенсацией;

Микроскопы.

Для оснащения помещений высокого риска заражения предложен рециркулятор. На выбор предоставляется одна из двух моделей: настенный «Дезар-5» или напольный «Дезар-7». Оба обладают высокой эффективностью в отношении

различных микроорганизмов, например, санитарно-показательных, золотистого стафилококка.

Помимо перечисленного оборудования для бактериологической лаборатории в комплект входят ламинарный, вытяжной, сухожаровой шкафы, бокс на разливы

сред, холодильная витрина, стол-мойка, дозаторы разного назначения.

Базовым для комплекта «Стандарт+» является аналогичное устройство: масс-спектрометр Microflex. Многие приборы также совпадает по назначению, но различаются по торговым маркам.

Из отличий отметим аквадистиллятор в полной комплектации, который обеспечивает высокий уровень очистки воды (тип II), и дополнительный автоматический проходной автоклав с распашными дверями. Полный список устройств для бактериологической лаборатории опубликован на странице «Врианты комплектации».

4. Дополнительное оснащение бактериологической лаборатории.

Оборудование BIOMIC V3 может быть использовано вместе с любым из комплектов или для дополнительного оснащения. Используется для идентификации бактерий и определения чувствительности к антибиотикам.

Микробиологический анализатор автоматически считывает, интерпритирует и выдает экспертное заключение. Для этого применяются диско-диффузный метод, Е-тесты, панели (ID-тесты) и хромогенные среды; так же выполняется подсчет колоний.

Оборудование обеспечивает быстрое определение результатов с идентификационных панелей разных производителей: API®, RapID, CrystalTM, а также 96-луночных плашек для микротипирования. Предоставляется возможность сохранения цветных изображений панелей и плашек. Исследования выполняются поэтапно; результаты передаются в систему ЛИС.

Подсчет колоний возможен в отдельном секторе. Удобство работы обеспечивают следующие особенности:

Разделение колоний по цветам и размерам;

Возможность различить соприкасающиеся колонии, а также колонии и дебрис;

Сохранение и печать изображений;

Определение результатов с любых хромогенных агаров, мембранных фильтров, спиральных чашек.

Анализатор отвечает строгим требованиям качества. Для этого предназначена встроенная программа контроля. Она позволяет оформлять сводные отчеты с использованием шаблонов из ПО системы, сохранять полученную информацию.

Устройство бактериологической лаборатории непосредственно влияет на успех проводимых исследований. Современное оснащение позволяет поддерживать высокий уровень точности и безопасности анализов. BioTyper является уникальной системой по предоставляемым возможностям.

5. Правила работы и поведения в лаборатории.

Особенностью бактериологических работ является постоянное соприкосновение сотрудников лаборатории с заразным материалом, культурами патогенных микробов, заражёнными животными, кровью

и выделениями больного. Поэтому все сотрудники бактериологической лаборатории обязаны соблюдать следующие правила работы, которые обеспечивают стерильность в работе и предупреждают возможность возникновения внутрилабораторных заражений:

В помещения бактериологической лаборатории нельзя входить без специальной одежды - халата и белой шапочки или косынки.

Нельзя вносить в лабораторию посторонние вещи.

Запрещается выходить за пределы лаборатории в халатах или надевать верхнее платье на халат.

В помещении бактериологической лаборатории категорически запрещается курить, принимать пищу, хранить продукты питания.

Весь материал, поступающий в лабораторию, должен рассматриваться как инфицированный.

При распаковке присланного заразного материала необходимо соблюдать осторожность: банки, содержащие материал для исследования, при получении обтирают снаружи дезинфицирующим раствором и ставят не прямо на стол, а на подносы или в кюветы.

Переливание жидкостей, содержащих патогенные микробы, производят над сосудом, наполненным дезинфицирующим раствором.

О случаях аварии с посудой, содержащей заразный материал, или проливания жидкого заразного материала надо немедленно сообщать заведующему лабораторией или его заместителю. Мероприятия по обеззараживанию загрязнённых патогенным материалом платья частей тела, предметов рабочего места и поверхностей осуществляют немедленно.

При исследовании заразного материала и работе с патогенными культурами микробов необходимо строго соблюдать общепринятые в бактериологической практике технические приёмы, исключающие возможность соприкосновения рук с заразным материалом.

Заражённый материал и ненужные культуры подлежат

Обязательному уничтожению, по возможности в тот же день. Инструменты, использованные в работе с заразным материалом, тотчас посте их употребления дезинфицируют, как и поверхность рабочего места.

При выполнении бактериологических работ нужно строго следить за чистотой рук: по окончании работы с заразным материалом их дезинфицируют. Рабочее место в конце дня приводят в порядок и тщательно дезинфицируют, а заразный материал и культуры микробов, необходимые для дальнейшей работы, ставят на хранение в запирающийся рефрижератор или сейф.

Работники бактериологической лаборатории подлежат обязательной вакцинации против тех инфекционных болезней, возбудители которых могут встретиться в исследуемых объектах.

6. Уборка лабораторного помещения.

Микробиологическую лабораторию необходимо содержать в чистоте. Следует регулярно проводить гигиеническую уборку помещений лаборатории. Обеспечить полную стерильность лаборатории очень трудно и это не всегда необходимо, но значительно снизить количество микроорганизмов в воздухе и на различных поверхностях в лабораторных помещениях возможно. Это достигается путём применения на практике методов дезинфекции, то есть уничтожения возбудителей инфекционных болезней на объектах внешней среды.

Пол, стены и мебель в микробиологической лаборатории обрабатывают пылесосом и протирают различными дезинфицирующими растворами. Обработка пылесосом обеспечивает освобождение предметов от пыли и удаление с них значительного количества микроорганизмов. Установлено, что при 4-кратном проведении щёткой пылесоса по поверхности предмета с него удаляется примерно 47 % микроорганизмов, а при 12-кратном - до 97 %. В качестве дезинфицирующих растворов чаще всего применяют 2-3%-ным раствором соды (бикарбонат натрия) или лизола (препарат фенола с добавлением зелёного мыла), 0,5-3%-ным водным раствором хлорамина и некоторыми другими дезинфектантами.

Воздух в лаборатории наиболее просто дезинфицировать проветриванием. Продолжительная вентиляция помещения через форточку (не менее 30-60 минут) приводит к резкому снижению количества микроорганизмов в воздухе, особенно при значительной разнице в температуре между наружным воздухом и воздухом помещения. Более эффективный и наиболее часто применяемый способ дезинфекции воздуха - облучение УФ-лучами с длиной волны от 200 до 400 нм. Эти лучи обладают высокой антимикробной активностью и могут вызывать гибель не только вегетативных клеток, но и спор микроорганизмов.

Работа с возбудителями заразных болезней требует, чтобы помещения лаборатории размещались в отдельном здании либо были изолированы от больничных палат, пищевых блоков. Диагностические лаборатории должны иметь два входа: один – для сотрудников, другой – для доставки материала на исследование. Допускается получение материала через передаточное окно. Помещения лаборатории делят на «заразную» и «чистую» зоны и располагаются по ходу выполнения анализов.

«Чистая» зона лаборатории включает:

Комнату для верхней одежды.
Помещение для подготовительных работ (препараторская, моечная для приготовления и розлива питательных сред и др.)
Стерилизационная.
Комната с холодильником для хранения питательных сред и диагностических препаратов.
Комната для отдыха и приема пищи.
Комната для работы с документацией.
Подсобные помещения.
Туалет.

В «заразной» зоне размещают:

1.Комнату для приема и регистрации материала, поступающего на исследование.

3.Комнаты для проведения бактериологических исследований.

4.Комнаты для проведения серологических исследований.

5.Помещение для люминисцентной микроскопии.

6.Комната для проведение зооэнтомологиеских работат.

7.Термостатная комната и автоклавная.

Помещения, где проводится работа с живыми организмами, оборудуются бактерицидными лампами.

Задача медицинской микробиологической лаборатории - диагностика инфекционных болезней. Для этого проводят выделение возбудителя и определение иммунного ответа организма на внедрение микроорганизмов (серологическая диагностика). Кроме того, проводят выявление носителей патогенных (болезнетворных) микроорганизмов. Имеются лаборатории, в которых проводят вирусологические исследования. В специальных санитарно-бактериологических лабораториях проводят исследования с целью выявления степени микробного загрязнения внешней среды и различных объектов.

Лабораторная комната предназначена для проведения микробиологических исследований. Она должна быть просторной и светлой. Стены красят светлой масляной краской, пол покрывают линолеумом, лабораторные столы- пластиком или стеклом, что удобно для влажной уборки и дезинфекции. В лабораторной комнате оборудуют рабочие столы для врача и лаборанта, место для окраски препаратов, термостат, холодильник, центрифугу, микроскоп, шкафы, раковину с подводкой горячей и холодной воды, газовые горелки (при отсутствии газа работают со спиртовыми горелками).

Число лабораторных комнат определяется объемом работы лаборатории. В крупных лабораториях выделяют отдельные комнаты для работы с различными видами возбудителей.

Рабочий стол устанавливают у окна, чтобы свет падал сбоку или прямо. На столе размещают горелку, бактериологические петли, банки с дезинфицирующим раствором и ватой.

Перед началом работы на столе размещают все необходимое для проведения исследования. Горелку устанавливают на расстоянии, равном предплечью работающего, т. е. в позиции, исключающей лишние движения во время работы. Размер пламени в горелке и правильное свечение регулируют до начала работы.

В термостате при проведении обычных исследований температура должна быть 37°С. В больших лабораториях может быть оборудована специальная термальная комната. Температуру ежедневно регистрируют.

Рис. 1 Сухожаровой шкаф

В холодильнике держат некоторые питательные среды, диагностические препараты, кровь, желчь и пр.

Центрифугу используют для отделения плотных частиц от жидкости (например, эритроцитов от сыворотки).

В шкафах держат штативы, посуду, сухие питательные среды, реактивы и т. п.

Около раковины должны находиться сосуд с дезинфицирующим раствором для обработки рук и аптечка с набором предметов для оказания первой медицинской помощи.

Бокс - строго изолированное помещение для проведения микробиологической работы в условиях, требующих особой стерильности. Обеспложивание воздуха проводят с помощью бактерицидных ламп. Подача в бокс через приточно-вытяжную вентиляцию обеззараженного воздуха определенной температуры и влажности является лучшим способом обеспечения нужных условий для работы. Обычно в боксе работают два человека. Входят в бокс через предбоксник, в котором переодеваются (халат, тапочки, шапочка, маска) и переходят в бокс через вторую дверь.

В боксе не разговаривают и избегают лишних движений.

Помещение для приготовления питательных сред должно быть рядом с моечной и стерилизационной. В этой комнате должна быть раковина с подводкой горячей и холодной воды, дистиллятор, плита (газовая или электрическая), шкафы или стеллажи для хранения сухих питательных сред, химических реактивов, стерильной посуды.

Моечная – комната для мытья и обработки посуды, которая должна иметь раковину (с холодной и горячей водой) и плиту. Моечную оборудуют столами, стеллажами, снабжают приспособлениями для мытья посуды: моющими средствами, ершами, тряпками.

В стерилизационной находятся приборы для стерилизации чистой посуды, питательных сред и обеззараживания отработанного материала: автоклавы, сушильный шкаф и др.

При наличии отдельной препараторской комнаты ее используют для подготовки, упаковки посуды и другой подсобной работы.

В регистратуре или части помещения, ее заменяющей, принимают и регистрируют материал, поступающий для исследования, и выдают заключения микробиологического исследования.

Виварий – помещение для содержания экспериментальных животных, имеется только в больших лабораториях.

Регламентация условий работы с возбудителями инфекционных заболеваний произведена в соответствии со степенью опасности микроорганизмов для человека. По этому признаку выделено четыре группы патогенных биологических агентов (ПБА):

Группа I: возбудители особо опасных инфекций (чума, натуральная оспа и др.)

Группа II: возбудители высококонтагиозных бактериальных, грибковых и вирусных инфекций (сибирская язва, холера, бешенство и др.)

Группа III: возбудители бактериальных, грибковых, вирусных и протозойных инфекций, выделенных в самостоятельные нозологические формы (коклюш, столбняк, туберкулез и др.)

Группа IV: возбудители бактериальных, грибковых, вирусных септицемий, менингитов, пневмоний, энтеритов, токсикоинфекций, острых отравлений (синегнойная инфекция и др.).

Большая часть микробиологических лабораторий работает с ПБА III и IV групп, а изучением возбудителей особо опасных инфекций (I и II группы) занимаются только специализированные лаборатории.

Базовые лаборатории, работающие с ПБА III и IV групп, должны соответствовать ряду требований (отдельное здание или отдельный вход, наличие систем водо-, электроснабжения, отопление, вентиляция и др.) и иметь необходимый набор помещений в соответствии с производственной мощностью и номенклатурой выполняемых исследований. Каждая лаборатория должна иметь «чистую» и «грязную» зоны.

«Грязная» зона включает помещения для приема и регистрации материала, боксы и комнаты для проведения микробиологических исследований, термостатная, автоклавная для обеззараживания материала. Окна и двери всех помещений должны герметично закрываться. Помещения для работы с живыми микроорганизмами должны быть оборудованы бактерицидными лампами, или иметь боксы биологической безопасности. Приточно-вытяжная вентиляция «грязной» зоны должна быть оборудована фильтрами тонкой очистки выбрасываемого воздуха. Обязательна маркировка столов, автоклавов, емкостей с дезинфицирующими растворами, стеллажей для чистого и инфицированного материала. Лаборатория должна быть оснащена специальной мебелью, иметь гладкие поверхности пола и стен, устойчивые к действию моющих и дезинфицирующих средств.

«Чистая» зона включает помещения для предварительных работ (моечная, препараторская, комната для приготовления и розлива питательных сред и др.), комнату для работы с документацией, помещения с холодильниками для хранения питательных сред и диагностических препаратов, гардероб для верхней одежды, комнату отдыха. В «чистой» зоне возможна работа с неживыми ПБА (серологические, молекулярно-генетические, биохимические исследования).

Обеспечение безопасности работы с патогенными микроорганизмами включает два основных фактора: технический и человеческий. Технический фактор - это наличие необходимых для работы помещений «чистой» и «грязной» зоны, оборудования, защитных систем и т.д. Человеческий фактор - это правильность действий человека по обеспечению безопасности, уровень владения профессиональной техникой, знание возможных источников и механизмов заражения, соответствующая подготовка и тренировка.

Работа в учебной бактериологической лаборатории также сопряжена с двумя опасными факторами - микроорганизмами, являющимися возбудителями инфекционных заболеваний и открытым огнем, что требует соблюдение мер противоэпидемической и противопожарной безопасности. Студенты обязаны ознакомиться с правилами техники безопасности и строго их соблюдать:

Необходимо:

· работать в медицинских халатах с длинным рукавом, медицинских шапочках и бахилах;

· личные вещи хранить в специально отведённом месте, верхнюю одежду оставлять в гардеробе;

· каждый вид деятельности осуществляется в определенной зоне: работа с микроорганизмами - на специально оборудованном лабораторном столе, заполнение протоколов - на рабочем столе;

· при попадании инфицированного материала на стол, пол и другие предметы немедленно сообщить преподавателю и произвести дезинфекцию;

· инфицированные материалы должны быть помещены в прочные непромокаемые контейнеры или контейнеры с дезинфицирующим раствором, которые закрывают перед удалением из лаборатории.

· во время проведения работы двери лаборатории должны держаться закрытыми.

· по окончании работы руки тщательно вымыть, а при необходимости обработать дезинфицирующим раствором.

· принимать пищу в лаборатории

· набирать жидкость в пипетку ртом

· зажигать одну спиртовку от другой

· переносить горящую спиртовку

· оставлять спиртовку горящей после окончания использования по назначению

· оставлять на рабочем месте нефиксированные препараты, чашки Петри с посевами и другую посуду с инфекционным материалом

· касаться руками исследуемого материала в засеянных чашках Петри