Ручная микроскопия мазка крови. Исследование клеточных элементов в периферической крови является одним из. Примерные данные анализа

Н. Пулетти

Изготовление мазков крови технически простое и быстрое. Для получения максимальной информации оценку клеток крови необходимо систематизировать.

Подготовка и окраска мазков крови

При заборе материала у идеально спокойного животного со средним диаметром уширения вены кровь должна быстро поступать в пробирку, содержащую антикоагулянт. Чаще всего используется ЭДТА (этилендиаминтетраацетат), потому что этот антикоагулянт позволяет лучше сохранить исследуемые форменные элементы крови. Однако для упреждения разного рода морфологической деградации клеток промежуток времени между взятием свежей и хорошо гомогенизированной крови и изготовлением препарата должен быть максимально коротким (J.W. Harvey, 2001; D. Walker, 2008).

Классическая окраска отличается от быстрой. В последние время такие методы быстрой окраски, как Diff-Quick ® , имеют преимущества, поскольку они устойчивы к вариациям рН растворов и образованию депо окрашивающего вещества. Тем не менее они менее эффективны для выявления полихроматофилов и плохо окрашивают гранулы базофилов и мастоцитов (J.W. Harvey, 2001; D. Walker, 2008). Чтобы получить специфическую визуальную картину ретикулоцитов, необходимо провести окраску с новым метиленовым синим (NBM). В пластиковой пробирке каплю крови перемешивают с двумя каплями NBM. Пробирку оставляют при комнатной температуре на 10 минут. Маленькую каплю после перемешивания помещают на предметное стекло и размазывают так же, как при выполнении мазка крови. Затем предметное стекло быстро высушивают на воздухе и исследуют под микроскопом с большим увеличением (×50–×100).

Систематическое исследование мазков крови

При оценке мазка крови очень важно руководствоваться единой схемой исследования.

Мазок крови, выполненный одним тонким (моноцеллюлярным) слоем с округлостью на конце, утолщается к основанию. Клетки крови оценивают на тонком слое, потому как толстый слой несёт в себе мало информации. При малом увеличении (×10 или ×20) краевую часть мазка, в основном его округлый конец, обычно обследуют на выявление агрегатов тромбоцитов или широких атипичных клеток (лифмобластов или дендритных клеток) (фото 4). Агрегаты тромбоцитов после их активации формируются in vitro. Этот феномен происходит иногда в результате трудного забора крови, что, например, наиболее часто отмечают у кошек (E. Duan Lassen, G. Weiser, 2006; S.L. Stockhman, M.A. Skkott, 2008; D. Walker, 2008).

Фото 4. Микроскопия мазка крови здоровой собаки (× 1000). Сгустки тромбоцитов

Исследование мазков крови - это довольно распространённый метод, позволяющий быстро диагностировать многие часто встречающиеся нарушения у собак и кошек. Основными условиями эффективного использования этого метода диагностики являются строгое соблюдение техники подготовки мазка и систематическое исследование с соблюдением алгоритма исследования.

Основные положения

После забора материала кровь следует быстро поместить в пробирку с антикоагулянтом для того, чтобы сохранить качество клеток.

Окраска новым голубым метиленовым позволяет идентифицировать ретикулоциты.

Оценку осуществляют на тонком слое мазка крови со считыванием под микроскопом на уровне его косичек.

Под систематическим исследованием мазка крови подразумевается алгоритм APEL.

СВМ № 5/2010

Кровь представляет собой жидкость сложного состава - плазму, в которой суспензированы форменные элементы: эритроциты (Red Blood Cells, RBCs - красные кровяные клетки), лейкоциты (White Blood Cells, WBCs - белые кровяные клетки) и тромбоциты (Platelets, Plt). При коагуляции крови после отделения сгустка остается жидкость, которая называется сывороткой, В периферической крови в норме содержатся зрелые клеточные элементы. Незрелые предшественники находятся в органе кроветворения - красном костном мозге.

Из методов количественного и качественного исследования форменных элементов крови наиболее распространен общеклинический анализ крови: определение концентрации гемоглобина, цветового показателя, содержания эритроцитов, лейкоцитов, лейкоцитарной формулы, описание особенностей морфологической картины клеток крови, оценка скорости оседания эритроцитов (СОЭ). При наличии изменений данных показателей дополнительно определяют количество ретикулоцитов и тромбоцитов. Эти исследования проводят всем стационарным больным. В амбулаторных условиях нередко ограничиваются недостаточно информативным определением количества гемоглобина, лейкоцитов и СОЭ (так называемой «тройки»). Клинический анализ периферической крови является одним из важнейших лабораторных тестов и иногда дает возможность сразу определить направление диагностического поиска (например, при появлении бластов в формуле крови или наличии гиперлейкоцитоза с абсолютным лимфоцитозом, тенями Гумпрехта). На основании клинического анализа крови трудно судить о гемопоэзе в целом. Более полное представление дает параллельное изучение костного мозга (цитологическое, цитохимическое и цитогенетическое).

При патологических состояниях гематологические изменения варьируют в зависимости от тяжести процесса, стадии заболевания и наличия осложнений, сопутствующей патологии, проводимой терапии. Необходимо учитывать, что изменения лабораторных показателей (например, изменение количества лейкоцитов и формулы крови) наблюдаются не только при патологических состояниях, но и при проведении некоторых диагностических процедур, изменении физиологического статуса организма (смена климата, время суток, возраст, физические нагрузки, гормональный фон).

Взятие и обработка крови

Исследование рекомендуется проводить утром натощак или через 1 ч после легкого завтрака. Исследуют, главным образом, капиллярную кровь, можно использовать венозную кровь (также взятую натощак). Не рекомендуется брать кровь после физической и умственной нагрузки, применения медикаментов, особенно при внутривенном или внутримышечном их введении, воздействия рентгеновских лучей и после физиотерапевтических процедур. В экстренных случаях этими правилами пренебрегают.

Гемоглобин (Hb)

Гемоглобин - основной дыхательный пигмент и главный компонент эритроцита, относящийся к хромопротеинам и выполняющий важную функцию переноса кислорода из легких в ткани и транспорта углекислого газа и протонов из тканей в легкие. Он также играет существенную роль в поддержании кислотно-основного равновесия крови. Буферная система, создаваемая Hb, способствует сохранению рН крови в определенных пределах.

Гемоглобины представляют собой тетрамерные белки, молекулы которых образованы различными типами полипептидных цепей. В состав молекулы входят по две цепи двух разных типов. Полипептидная цепь каждой из субъединиц гемоглобина специфическим образом уложена вокруг большого плоского железосодержащего кольца гема - соединения протопорфирина IX с железом. Гем придает гемоглобину характерную окраску.

Свойства индивидуальных гемоглобинов неразрывно связаны как с их четвертичной, так и с вторичной и третичной структурами. Наиболее распространенные гемоглобины имеют следующую тетрамерную структуру: НЬА (нормальный гемоглобин взрослого человека) a 2 b 2 ; HbF (фетальный гемоглобин) - a 2 g 2 ; HbS ((гемоглобин при серповидноклеточной анемии) - a 2 s 2 ; HbA 2 (минорный гемоглобин взрослого человека) -a 2 d 2 . Четвертичная структура способствует выполнению гемоглобином его уникальной биологической функции и обеспечивает возможность строгой регуляции его свойств.

Нормальные величины. У здоровых людей концентрация гемоглобина в крови составляет: мужчины 132-164 г/л

женщины 115-145 г/л

Дневные колебания. Значения гемоглобина минимальны утром и максимальны вечером. Значимым изменением гемоглобина считается 15 г/л или более.

Клиническое значение

Снижение содержания гемоглобина в крови ниже нормы для данного пола и возраста называют анемией. Согласно критериям ВОЗ, анемия как клинический синдром определяется при снижении концентрации гемоглобина в периферической крови ниже 110 г/л для любого возраста и пола.

Следует иметь в виду, что диагностика анемии не может проводиться лишь на основании определения концентрации гемоглобина в крови. Это исследование только устанавливает факт наличия анемии. Для уточнения ее характера необходимо определение количества эритроцитов, цветового показателя, изучение морфологии эритроцитов и др. показателей.

Эритроциты (RBC - red blood cells - красные кровяные клетки)

Эритроциты - наиболее многочисленные форменные элементы крови, основное содержание которых составляет гемоглобин. Зрелые эритроциты - безъядерные клетки, имеющие двояковогнутую дисковидную форму. Плоский диск лучше всего адаптирован к транспорту веществ как из клетки, так и внутрь ее, а также к диффузии газов к центру клетки. Площадь поверхности диска в 1,7 раза больше поверхности соответствующей по объему сферы и может умеренно изменяться без растяжения мембраны клетки. Двояковогнутая форма, эластичность, деформируемость и сохранение структуры клетки при удалении из нее гемоглобина зависят от особенностей строения эритроцита, прежде всего его цитоскелета. Цитоскелет эритроцитов отличается от цитоскелета ядерных клеток. У эритроцитов есть только поверхностный цитоскелет, который представляет собой устойчивое к действию детергентов соединение белков друг с другом и с мембраной, образующее своеобразную сеть вдоль внутренней поверхности плазматической мембраны, обращенную к цитоплазме. Этот цитоскелет называют еще скелетом мембраны, т.к. он делает ее прочнее и обеспечивает единство с липидным слоем, придает внутреннюю подвижность и гибкость.

Цитоскелет эритроцита играет важную роль в его способности к деформации. Дисковидный эритроцит может легко пройти через микропоровый фильтр 3 мкм, через стенку синуса селезенки.

В эритроцитах осуществляется множество ферментативных реакций. Они адсорбируют аминокислоты, липиды, токсины. Благодаря содержанию в них гемоглобина, участвуют в регуляции кислотно-основного равновесия. За счет того, что мембрана эритроцитов проницаема для анионов и непроницаема для катионов и гемоглобина, они участвуют в регуляции ионного состава плазмы. Кроме того, эритроциты обладают антигенными свойствами, но основная их роль - снабжение тканей кислородом и участие в транспорте углекислоты.

Клиническое значение.

Снижение количества эритроцитов (эритроцитопения) является одним из основных критериев анемического синдрома. От истинной анемии необходимо отличать гидремию, связанную с увеличением объема плазмы за счет притока тканевой жидкости (например, при схождении отеков). Причинами анемий являются кровопотери, нарушения кроветворения в костном мозге (дефицит железа, фолиевой кислоты, витамина В 12 , апластические процессы) и повышенный гемолиз. Степень эритроцитопении варьирует и в тяжелых случаях (апластическая анемия, гемолитическая анемия в период криза, В 12 -дефицитная анемия) может достигать 1х10 12 /л и менее. Кроме этого, уменьшение количества эритроцитов имеет место при лейкозах, множественной миеломе, неходжкинских лимфомах, системной красной волчанке, ревматоидном артрите, метастазах злокачественных опухолей и др. Уменьшение количества эритроцитов наблюдается также при недостаточном содержании белка в пище, голодании, вегетарианской диете.

Увеличение количества эритроцитов в единице объема крови называется полиглобулией или эритроцитозом. В физиологических условиях наблюдается у новорожденных в первые 3 дня жизни (временное сгущение крови в результате потери жидкости организмом при внезапном переходе к легочному дыханию и кожной респирации), у взрослых при усиленном потоотделении, голодании. При подъемах на большую высоту эритроцитоз обусловлен не сгущением крови, а действительным повышением продукции эритроцитов в связи с гипоксией. Эритроцитозы наблюдаются при патологических состояниях как симптомы целого ряда заболеваний (вторичные эритроцитозы). Вторичные симптоматические эритроцитозы делят на абсолютные и относительные. Причиной абсолютных полиглобулии является реактивное усиление эритропоэза с увеличением массы циркулирующих эритроцитов (при врожденных пороках сердца, хроническом обструктивном бронхите, гипернефроидном раке, гемангиобластоме мозжечка и др.). Сгущение крови без увеличения количества эритроцитов в результате уменьшения объема плазмы при длительной рвоте, диарее, ожогах лежит в основе относительных полиглобулий.

От симптоматических эритроцитозов следует отличать заболевания крови, относящиеся к гемобластозам (истинная полицитемия).

Изменения размера эритроцитов

Микроцитоз - преобладание в мазках крови эритроцитов с диаметром малой величины (5,0-6,5 мкм). Этот признак наблюдается при наследственном сфероцитозе, железодефицитной анемии, талассемии и др. Эти клетки имеют уменьшенный объем и количество гемоглобина. Основным фактором является нарушение синтеза гемоглобина, что характерно для железодефицитной анемии, а также некоторых гемоглобинопатий.

Шизоциты - мелкие фрагменты эритроцитов, либо дегенеративно измененные клетки неправильной формы диаметром 2,0- 3,0 мкм. Они встречаются в мазках крови при микроангиопатической гемолитической анемии, васкулитах, гломерулонефритах, уремии, маршевой гемоглобинурии, гемоглобинопатиях, ДВС-синдроме, миелодиспластическом синдроме и других заболеваниях.

Макроцитоз - присутствие в мазках крови эритроцитов диаметром >9,0 мкм. Этот признак выявляется у новорожденных как физиологическая особенность, а также у взрослых при макроцитарных анемиях, заболеваниях печени, дефиците витамина В 12 и фолиевой кислоты, при анемии беременных, у больных со злокачественными опухолями, при понижении функции щитовидной железы, миелопролиферативных заболеваниях.

Мегалоцитоз - появление в мазках крови эритроцитов диаметром 11,0-12,0 мкм, гиперхромных, без просветления в центре, овальной формы. Обнаруживаются при анемии, обусловленной дефицитом витамина В 12 и фолиевой кислоты, при анемии беременных, глистной инвазии, дизэритропоэзах.

Анизоцитоз - присутствие в мазках крови эритроцитов, различающихся по размеру: с преобладанием эритроцитов малого диаметра - микроанизоцитоз, с преобладанием эритроцитов большого размера - макроанизоцитоз. Анизоцитоз наблюдается при железодефицитной анемии как в начальном периоде заболевания, так и как вследствие проводимой терапии железом, в результате чего в крови появляются эритроциты, богатые гемоглобином, сформировавшиеся в период восстановления уровня железа в крови, одновременно циркулируют эритроциты малого размера, которые образовались до начала лечения. Анизоцитоз имеет место при заболеваниях, характеризующихся наличием нормального и патологически измененного пула эритроцитов. Так при гипопластической анемии, пароксизмальной ночной гемоглобинурии, миелопролиферативных заболеваниях, талассемии присутствуют как микроциты, так и нормоциты, а также макроциты. Анизоцитоз характерен для большинства анемий различного типа.

Изменения формы эритроцитов

Изменения формы эритроцитов разной степени выраженности (пойкилоцитоз) могут наблюдаться практически при любой анемии, вне зависимости от ее генеза. В норме незначительная часть клеток также может иметь форму, которая отличается от дисковидной.

Лишь немногие типы эритроцитов оказываются специфически характерными для конкретных патологий. Это наследственные заболевания: наследственный сфероцитоз - болезнь Минковского-Шоффара (микросфероциты) и серповидно-клеточная анемия (серповидные клетки) . Остальные формы могут появляться при различных патологических состояниях. Здесь важно разграничить обратимые формы (эхиноциты и стоматоциты), которые еще могут быть возвращены в нормальное состояние, и необратимо измененные формы (акантоциты, кодоциты - мишеневидные клетки, сфероциты, необратимо измененные стоматоциты).

Эхиноциты - сферические клетки, на поверхности которых достаточно регулярно располагается 30-50 спикул. При этом отношение поверхности к объему остается нормальным. Трансформация дискоцит-эхиноцит в начальной стадии обратима, причем было показано, что спикулы вновь появляются на поверхности клетки каждый раз в одном и том же месте. Близость стеклянной поверхности часто вызывает образование эхиноцитов. Полагают, что этот эффект связан с локальным защелачиванием среды рН > 9.0. Изменение рН от нейтрального до щелочного и обратно вызывает обратимый переход дискоцита в сфероцит и обратно.

При суспендировании эритроцитов в изотонической среде часто происходит образование эхиноцитов. Добавление альбумина может вернуть клетки к нормальной дискоцитной форме. Эхиноциты обнаруживаются in vivo обычно в тех случаях, когда в клетках низко содержание АТФ или нарушен жирнокислотный состав плазмы. Если клетка долго пребывает в состоянии эхиноцита, возникает процесс потери липидного компонента мембраны, и изменения формы становятся необратимыми. Эхиноциты часто появляются как артефакт, возможно появление их при уремии совместно с акантоцитами, наследственном дефиците пируваткиназы, фосфоглицераткиназы.

Стоматоциты (или гидроциты) имеют увеличенный на 20--30% объем и площадь поверхности, щелевидную форму центрального просвета (пэллора). Эти клетки образуются под действием весьма разнообразных факторов: низкого рН, не проникающих анионов, катионных детергентов, хлорпромазина, винбластина, витамина А.

Серповидные клетки - характерны для серповидно-клеточной анемии и других гемоглобинопатий, содержат гемоглобин S, способный полимеризоваться и деформировать мембрану, особенно при низком содержании кислорода в крови. На этом основана "проба жгута", когда для увеличения содержания этих клеток в препарате перед взятием крови на палец пациента накладывают жгут, чтобы вызвать местную гипоксию.

Мишеневидные клетки (кодоциты) имеют увеличенную площадь поверхности за счет избыточного содержания холестерина. Они имеют окрашенную периферию и на фоне светлой центральной части небольшой более темный сферический участок. Эти формы характерны для а- и b- талассемии, гемоглобинопатий С и S, свинцовой интоксикации и болезней печени, в частности, длительной механической желтухи. Кодоциты особенно часто встречаются при обструктивной желтухе (по Bessis до 75%).

Акантоциты (поверхность клетки имеет зубчатую форму), в отличие от эхиноцитов, не способны к возврату в нормальное состояние при помещении в свежую плазму. Подобные клетки сфероидальны (не имеют пэллора), имеют от 3 до 12 спикул с булавовидными расширениями на концах. Длина и толщина спикул сильно варьируют. Объем, площадь поверхности, содержание гемоглобина обычно нормальны. Акантоциты встречаются при тяжелых формах гемолитической анемии, болезнях печени, наследственной абеталипопротеинемии, наследственном дефиците пируваткиназы, наследственном сфероцитозе (тяжелые формы). Незначительное число акантоцитов можно наблюдать у пациентов после спленэктомии.

Слезовидные клетки (дакриоциты) в отличие от акантоцитов имеют одну большую спикулу и часто содержат включение - тельце Гейнца; обычно являются микроцитами. Эти клетки особенно часто выявляются при миелофиброзе, реже при различных формах анемии.

Стоматоциты наблюдаются при наследственном стоматоцитозе. Причиной их появления является повышенная проницаемость мембраны для натрия и калия. После того как компенсаторное увеличение ионного транспорта оказывается уже не эффективным, цитоплазма обогащается натрием, теряет калий и гидратируется. У мишеневидных клеток также увеличена концентрация натрия и снижена концентрация калия. Большой объем стоматоцита не мешает ему достаточно долго выживать при микроциркуляции. В меньшем числе (приблизительно в 3% от общей популяции клеток) стоматоциты встречаются при обструктивных болезнях печени, алкогольном циррозе, кардиоваскулярной патологии, злокачественных опухолях. Возможно выявление стоматоцитов как артефактов.

Ксероциты - уплотненные дегидратированные клетки нерегулярной формы, которые характерны для наследственной болезни - семейного ксероцитоза. В физиологическом смысле эти клетки противоположны стоматоцитам и возникают при потере катионов и, следовательно, воды. Тем не менее, ксероцит иногда по форме напоминает стоматоцит (но с уплотненной, дегидратированной цитоплазмой).

Микросфероциты - специфические клетки для наследственного микросфероцитоза. Изменение спектрина приводит к нарушениям устойчивости мембраны. Выявление их на мазках крови иногда требует большой тщательности. Характерно, что микросфероциты в мазке выглядят как однородные, без существенного пойкилоцитоза, их количество - от 1-3 до 20-30 в поле зрения (остальные клетки нормальны, всего в поле зрения 50 клеток). Если популяция микросфероцитов разнородна, то это более характерно для гемолитической анемии. Выявляемый на препаратах микросфероцитоз, который сочетается с анизоцитозом и пойкилоцитозом также может свидетельствовать о механическом повреждении эритроцитов (синдром фрагментации эритроцитов), ожоговой болезни, дефиците глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы. Сфероцитоз можно рассматривать как терминальную, предгемолитическую стадию, в которую переходят эхиноциты, акантоциты и стоматоциты при необратимом повреждении.

Эллиптоциты в норме составляют менее 1% всех клеток. При различных анемиях (талассемия, железодефицитная и особенно мегалобластная анемии) их содержание доходит до 10%. При этом популяция эллиптоцитов неоднородна по размерам. Если эллиптоциты однородны и составляют более 25%, то это более характерно для наследственного эллиптоцитоза.

Дегмациты (укушенные клетки) часто содержат тельца Гейнца и наблюдаются при гемолитической анемии, вызванной отравлением окислителями. В очень тяжелых случаях отравлений на препаратах можно наблюдать полутени эритроцитов (эксцентроциты).

Шистоциты (шлемовидные и треугольные клетки) наблюдаются при микроангиопатии, гемолитической анемии под действием физических факторов, злокачественной гипертонии, уремии, а также в случаях осложнений при протезировании сосудов и клапанов.

Индексы эритроцитов

Показатели MCV (mean corpuscular volume, средний объем эритроцита, средний корпускулярный объем), МСН (mean corpuscular hemoglobin, среднее содержание гемоглобина в эритроците), МСНС (mean corpuscular hemoglobin concentration, средняя корпускулярная концентрация гемоглобина), а также методы их вычисления были введены в 1929 г. Винтробом (Wintrobe, 1993).

Средний объемэритроцита (MCV) вычисляется путем деления гематокритной величины 1 мм 3 крови на число эритроцитов в 1 мм 3 по формуле:

MCV=ГЕМАТОКРИТ 1 мм 3 /ЧИСЛО ЭРИТРОЦИТОВ В 1 мм 3

Результат выражают в кубических микронах (мкм 3), или в фентолитрах (фл). На практике средний объем эритроцита вычисляют путем умножения гематокрита (%) на 10 и деления полученного произведения на число эритроцитов в миллионах в кубическом миллиметре крови:

MCV=ГЕМАТОКРИТ(%)х10/ЧИСЛО ЭРИТРОЦИТОВ(млн. кл./мм 3)

Среднее содержание гемоглобина в эритроците (МСН) устанавливается по формуле:

MCH=ГЕМОГЛОБИН(г/100мл)х10/ЧИСЛО ЭРИТРОЦИТОВ (млн/мкл.)

Результат выражают в пикограммах (пг), норма составляет 27-31 пг. Этот показатель характеризует среднее содержание гемоглобина в отдельном эритроците. Он аналогичен цветовому показателю, который входит в общий анализ крови и широко используется в клинике. На основе этих индексов анемии разделяют на нормо-, гипо- и гиперхромные.

Средняя концентрация гемоглобина в эритроците (МСНС) вычисляется путем деления концентрации гемоглобина в г/100 мл на гематокрит и умножения на 100:

MCHC = ГЕМОГЛОБИН(г/дл)/ГЕМАТОКРИТ(%)х100

Выражается этот индекс в г/дл. Различия между двумя последними индексами должны быть понятны. Первый показатель указывает на массу гемоглобина в среднем эритроците и выражается в долях грамма (пикограммах). Второй индекс показывает концентрацию гемоглобина в среднем эритроците, т.е. соотношение содержания гемоглобина к объему клетки. Он отражает насыщение эритроцита гемоглобином и в норме составляет 30-37 г/дл. В отличие от среднего содержания гемоглобина в эритроците (МСН) МСНС не зависит от среднего клеточного объема и является чувствительным тестом при нарушениях процессов гемоглобинообразования. Информативность МСНС при железодефицитных анемиях составляет 85% (Золотницкая Р.П., 1982).

При нормохромных анемиях повышение или понижение среднего размера эритроцитов связано с соответствующим повышением или снижением массы гемоглобина, содержащегося в клетке, средняя концентрация гемоглобина (МСНС) остается нормальной. При гипохромных анемиях снижение среднего содержания гемоглобина в эритроците более значительно, чем уменьшение среднего объема клеток. Поэтому МСНС субнормальна.

За исключением наследственного микросфероцитоза, в некоторых случаях серповидноклеточной анемии и гемоглобиноза С, МСНС не превышает 37 %. Следовательно, предельная гиперхромия встречается очень редко. Величина 37% - практически верхний предел, насыщения эритроцита гемоглобином, и дальнейшее увеличение концентрации может закончиться кристаллизацией.

Показатель MCV является наиболее информативным для исследования и диагностики анемий. МСН и МСНС несут меньшую клиническую информацию. Взаимосвязь эритроцитарных индексов выражается формулой:

МСН (пг)=МСНС(г/л)хМСV(фл)/1000

Современные гематологические автоматы получают величины МСН и МСНС расчетным путем по программе, заложенной в процессор. При отсутствии автоматов эритроцитарные индексы удобно вычислять по номограмме Мазона.

Цветной показатель

(ЦП) - относительная величина, характеризующая среднее содержание гемоглобина в эритроците. Формула для вычисления цветового показателя имеет вид:

ЦП=ГЕМОГЛОБИН (г/л)х3 / первые 3 цифры содержания эритроцитов

В норме ЦП составляет 0,86-1,05. Этот показатель имеет такую же клиническую интерпретацию, как среднее содержание гемоглобина в эритроците. Однако цветовой показатель определяется в условных единицах, поэтому имеет отвлеченное значение.

Показатель анизоцитоза (RDW) характеризует неоднородность размеров эритроцитов значительно точнее, чем это можно получить при визуальной оценке мазка крови, измерении среднего диаметра эритроцитов и построении кривой Прайс-Джонса. Оценка степени анизоцитоза под микроскопом сопровождается целым рядом ошибок. При высыхании эритроцитов их диаметр уменьшается на 10-20%, в толстых мазках он меньше, чем в тонких. В отличие от морфологических методов оценки анизоцитоза автоматизированный кондуктометрический подсчет обладает более высокой точностью и воспроизводимостью результатов.

Таблица 1

Похожая информация.

WBC (white blood cells) - количество лейкоцитов крови (х10 9 /л). Измерение числа лейкоцитов проводится после полного лизиса эритроцитов специальным реактивом. Все частицы размером более 35 фл считаются как лейкоциты. Тромбоциты, размер которых меньше порогового значения 35 фл, исключаются из подсчета. Коэффициент вариации (CV) при автоматическом определении этого показателя составляет 2-3%.

При наличии резистентных к лизису эритроцитов они определяются как лейкоциты и вызывают повышение числа WBC. В этих случаях следует обратить внимание на изменение формы RBC гистограммы.

Таблица 11. Возможные ошибки измерения лейкоцитов

6.4. Подсчет лейкоцитарной формулы

Многие современные гематологические анализаторы определяют от 6 до 10 показателей лейкоцитарной формулы с учетом относительного и абсолютного количества клеток, так называемые 3Diff или 5Diff .

6.4.1 Гематологические анализаторы, определяющие 18 параметров крови, дифференцируют все WBC на три популяции (3Diff). В основе работы анализаторов 3Diff лежит принцип кондуктометрии. Клетки дифференцируются по объему на 3 категории: лимфоциты, нейтрофилы и средние клетки, состоящие преимущественно из моноцитов с добавлением эозинофилов и базофилов. Определяется как относительное (%), так и абсолютное их содержание (клетки/л).

Автоматические гематологические анализаторы, определяющие 26 и более параметров крови, дифференцируют WBC на пять популяций (5Diff). В основе работы анализаторов 5Diff используется комбинация кондуктометрического метода с другими технологиями, такими как: метод лазерного светорассеивания, радиочастотный анализ, использование дифференцирующих лизатов, цитохимический метод.

Автоматический дифференцированный счет лейкоцитов должен выполняться в день взятия крови. Для получения наиболее точных результатов дифференциального анализа лейкоцитов рекомендуется исследование образцов крови проводить в промежуток времени от 30 минут до 5 часов после взятия материала, при значительном лейкоцитозе после предварительного разведения крови – от 5 минут до 1 часа.

После 24-часового интервала изменения, возникшие при хранении, могут воздействовать на систему «сигналы тревоги» и искажать результат. На дифференциальный счет популяций лейкоцитов влияют те же факторы, что и на общее число лейкоцитов. Появление «сигналов тревоги» указывает на наличие патологических изменений в исследуемом образце и требует микроскопического исследования окрашенного мазка крови.

6.4.2 Некоторые факторы, влияющие на дифференциальный счет лейкоцитов в гематологических анализаторах 3Diff

LY и LY%: микроформы бластов, нормобласты, резистентные к лизису эритроциты (например, эритроциты, содержащие малярийный плазмодий) могут быть причиной ошибочного измерения числа LY.

MO и MO%: крупные лимфоциты, атипичные лимфоциты, плазматические клетки, бластные клетки и избыточное количество базофилов могут оказывать влияние на точность подсчета МО. Часть эозинофилов также может просчитываться в данном канале.

GR и GR%: избыток эозинофилов, метамиелоцитов, промиелоцитов, бластных клеток и плазматических клеток могут быть причиной ошибочного подсчета GR и GR%.

На лейкоцитарной гистограмме в анализаторах 3Diff субпопуляции лейкоцитов попадают в три главные области гистограммы распределения WBC, которые отделены с помощью пороговых значений (дискриминаторов). Если результаты подсчета попадают в область нормальных значений, то никаких маркеров, предупреждающих о возможной патологии не появляется. Форма гистограммы изменяется при нарушении распределения лейкоцитов по популяциям или недостаточном лизисе эритроцитов.

Таким образом, гематологические анализаторы 3Diff в большинстве случаев позволяют выявлять изменения лейкоцитарной формулы крови, однако не способны проводить полную дифференцировку лейкоцитов. При наличии микроформ бластных клеток, по своему размеру сходных с лимфоцитами, анализаторы, принцип измерения которых основан только на кондуктометрическом методе, будут относить их к популяции мелких клеток (лимфоцитов).

6.4.3 В гематологических анализаторах 5Diff подсчитываются все 5 классов лейкоцитов, встречающихся в норме: нейтрофилы, лимфоциты, моноциты, эозинофилы и базофилы. Использование одновременно нескольких методов анализа позволяет значительно улучшить качество дифференцировки клеток и, следовательно, работу анализатора. В анализаторах данного типа более сложная система «сигналов тревоги», позволяющая уточнить наличие патологических клеток (незрелых нейтрофилов, атипичных лимфоцитов, бластных клеток, нормобластов). При плохом качестве материала анализаторы выдают дополнительные «сигналы тревоги», такие, например, как сгустки тромбоцитов, фрагменты эритроцитов-призраков. Они снабжены соответствующими программами обнаружения незрелых клеток, активированных лимфоцитов, бластных клеток.

Обозначения флагов дифференциальных параметров зависят от фирмы-производителя анализатора.

Это могут быть: LIC (Large Immature Cells), которые, в свою очередь, подразделяются на:

IMG (Immature Granulocytes), незрелые гранулоциты,

IMM (Immature Monocytes) незрелые моноциты,

IML (Immature Lymphocytes) незрелые лимфоциты,

LS (Left Shift) – левый сдвиг, указывающий на возможность левого сдвига в формуле крови (палочкоядерные нейтрофилы)

исследование мазка крови.

При лимфоцитозах или наличии измененных по объему лимфоцитов появляются следующие флаги:

Аtipical Lymphocytes, Variant

Lymphocytes, Reactive

Lymphocytes, Abnormal Lymphocytes

Большинство гематологических анализаторов 5Diff имеют жесткую систему как внутреннего, так и внешнего контроля качества, что делает их работу более надежной.

Несмотря на все достоинства, даже самые современные гематологические анализаторы обладают некоторыми ограничениями, которые касаются точной морфологической оценки патологических клеток (например, при лейкозах), и не в состоянии полностью заменить световую микроскопию.

Контроль качества исследования клеточного состава крови на автоматических гематологических анализаторах
1. Порядок проведения контроля качества

Комплексная система контроля качества клинических лабораторных исследований осуществляется путем:

Установления единых требований к аналитическому качеству количественных методов;

Ежесерийного выполнения процедур внутрилабораторного контроля качества с использованием контрольных материалов (оперативный контроль качества);

Регулярного участия в программах внешней оценки качества (ГОСТ Р 53133.1―2008) .

Внутрилабораторный контроль качества представляет собой систему повседневного слежения за точностью получаемых на гематологическом анализаторе результатов для поддержания стабильности аналитической системы, выявления и устранения недопустимых случайных и систематических погрешностей и заключается в сопоставлении результатов исследования проб с результатами исследования контрольного материала и измерении величины отклонения.

Проводится в соответствии с инструкцией к прибору и инструкцией к используемым контрольным материалам и требованиями стандарта ГОСТ Р 53133.2―2008 ..

Внутрилабораторный контроль качества должен быть:

Систематическим, повседневным, проводиться по единым правилам, т.е. анализ контрольных проб должен включаться в обычный ход работы лаборатории;

Охватывать все области измерений (норма, высокие и низкие патологические значения);

Производиться в реальных условиях работы лаборатории (так же, как обычные пробы пациентов, т.е. тем же персоналом и в тех же условиях);

Объективным (желательно "шифровать" контрольный материал, чтобы исполнитель не знал, где опыт, а где контроль).

Принцип проведения внутреннего контроля достаточно прост: периодически (в каждой серии) нужно проводить измерение одного и того же контрольного материала, а результаты этих измерений заносить на контрольную карту.

Хорошо организованная система внутреннего контроля качества позволяет достаточно эффективно выявлять ошибки, связанные с:

внешними варьирующими факторами (реактивы, калибраторы, расходные материалы);

внутренними варьирующими факторами (организация в лаборатории "домашних реактивов", обучение персонала, обслуживание приборов, ведение документации, реакция персонала на возникающие проблемы).

Концентрация гемоглобина в большинстве гематологических анализаторов определяется фотометрически. Различное влияние липидемии на определение гемоглобина связано с техническими особенностями прибора. Величина результирующей ошибки зависит от оптической геометрии прибора: размера выходного отверстия из кюветы для образцов и расстояния до фотодиода.

Контролем за правильностью измерения концентрации гемоглобина может служить величина МСНС.Чаще всего увеличение МСНС свидетельствует об ошибках, допущенных при измерении пробы (погрешности определения гемоглобина или MCV). В подобных ситуациях наиболее точные результаты определения концентрации гемоглобина гемиглобинцианидным методом могут быть получены на фотометре при добавлении в холостую пробу 20 мкл сыворотки больного. Таким образом, данный параметр может быть использован и как индикатор ошибок, допущенных на аналитическом или преаналитическом этапах работы.

Требования к качеству исследований клеточного состава крови

Для оценки качества исследований рассчитываются следующие статистические

показатели:

Среднее арифметическое значение или средняя арифметическая (Х):
- предварительная оценка прецизионности (по 10 измерениям в одной серии) - CV 10 ;

Предварительная оценка относительного смещения – В 10 ;

Окончательная оценка прецизионности (по 20 измерениям) CV 20 ;

Окончательная оценка относительного смещения В 20 .

В таблице 11 представлены рекомендуемые стандартом ГОСТ Р 53133.1─2008 (приложение А) внутрилабораторных погрешностей гематологических исследований. Эти ПДЗ вычислены как компромисс между основанными на коэффициентах биологической вариации пределами погрешностей и фактическими характеристиками точности, достигнутыми большей частью клинико-диагностических лабораторий страны по данным системы внешней оценки качества.

Таблица 12

Оперативные пределы допускаемых значений

Вид исследования
Вид исследования	В 10	CV 10	B 20	CV 20	B 1
Общий гемоглобин в крови	± 5	4	± 4	4	± 9
Эритроциты в крови	± 7	4	± 6	4	± 11

В таблице 13 представлены ПДЗ, рассчитанные на основе имеющихся в литературе данных о биологической вариации. Их можно рассматривать как желательные нормативы.

Таблица 13

Оперативные пределы допускаемых значений, рассчитанные на основе данных о биологической вариации

Вид исследования	Оперативные пределы допускаемых значений
	для установочной серии внутрилабораторного контроля качества, коэффициент вариации, %				для результата единичного измерения, относительное смещение, %
	В 10	CV 10	B 20	CV 20	B 1
Эритроциты, подсчет в крови	± 2,7	2,2	± 2,4	2,0	± 4,9
Эритроциты, средний объем клетки	± 1,6	0,9	± 1,5	0,8	± 2,5
Гемоглобин, концентрация в крови	± 2,7	1,9	± 2,4	1,8	± 4,5
Гемоглобин, средняя концентрация в эритроците (МСНС)	± 1,3	1,2	± 1,2	1,1	± 2,5
Гемоглобин, среднее содержание в одном эритроците (МСН)	± 1,9	1,1	± 1,7	1,0	± 2,9
Гематокрит	± 2,6	1,9	± 2,4	1,8	± 4,5
Лейкоциты, подсчет в крови	± 9,0	7,5	± 8,0	6,9	± 16,3
Лимфоциты, подсчет в крови	± 10,6	7,1	± 9,7	6,5	± 17,6
Моноциты, подсчет в крови	± 18,7	12,2	± 17,1	11,2	± 30,7
Нейтрофилы, подсчет в крови	± 14,1	11,0	± 12,7	10,1	± 24,9
Тромбоциты, подсчет в крови	± 8,7	6,2	± 7,9	5,7	± 14,8
Тромбоциты, средний объем	± 3,6	2,9	± 3,2	2,7	± 6,5
Ретикулоциты, подсчет в крови	± 11,2	7,5	± 10,2	6,9	± 18,5

Цель занятия. Научиться дифференцировать форменные элементы крови по окрашенным мазкам, выводить лейкограмму.

Объекты исследования и оборудование. Окрашенные мазки крови животных разных видов.

Микроскопы, препаратоводители, 11-клавишные счетчики, стеклянные палочки, иммерсионное масло, бензин, вата.

Исследование окрашенных мазков крови. Окрашенные мазки крови исследуют под микроскопом, используя при этом объектив X 90 и иммерсионное масло. Последнее после работы удаляют с мазка сухой ваткой, чтобы сохранить препарат.

В окрашенных мазках крови определяют размер, форму, характер окраски клеток и их структурных элементов - ядра, цитоплазмы и включений; соотношение между форменными элементами различных видов.

Эритроциты. При оценке эритроцитов обращают внимание на их размер, форму, окраску и клеточные включения. Эритроциты млекопитающих в мазках крови округлой формы (у верблюдов и лам овальной), у птиц и рыб - овальной формы и содержат ядро. Эритроциты окрашиваются кислыми красителями в розовый цвет (ацидофильны), причем центральная часть оказывается более бледной, так как центр эритроцита вогнут. Такое окрашивание - более интенсивное по периферии и бледное в центре - называют ортохромазией, а эритроциты - ортохромными клетками. Диаметр эритроцитов составляет (1 · 10" 3 мм): у крупного рогатого скота 4,4-7,7; овец 3-5,6; коз 2,1-4,9; лошадей 4,5-7,5; свиней 4-9; собак 4,2-10; кошек 5-6,2; кур 9,3 ? 5,6-12,2 х 7,2; рыб 9,8 ? 14-10,2 ? 16,8.

Тромбоциты. В мазках крови тромбоциты, или кровяные пластинки, овальной, округлой или угловатой формы. Периферическая, гомогенная их часть - гиаломер - окрашивается в голубой цвет, а центральная, состоящая из зернышек, - грануломер - в фиолетовый или в красно-фиолетовый. Чаще тромбоциты в мазках лежат группами, образуя конгломераты из пяти-шести пластинок и более, что указывает на их хорошую способность к агглютинации. Диаметр тромбоцитов 1-4 мкм.

Лейкоциты. В зависимости от свойств цитоплазмы и характера зернистости лейкоциты подразделяют на гранулоциты, или зернистые (базофилы, эозинофилы и нейтрофилы), и агранулоциты, или незернистые (лимфоциты и моноциты) (см. цв. вкл., рис. 9-15).

Базофилы (Б) - округлой или овальной формы клетки диаметром 11 - 17 10" 3 мм. У зрелых форм ядро полиморфное, плохо заметное, с неясными очертаниями, окрашено в фиолетовый цвет или слабо-фиолетовый с бордовым оттенком цвета. Цитоплазма бледно-розовая или бледно-фиолетовая, что обусловлено растворением гранул в процессе приготовления мазка. Крупные гранулы округлые или расплывчатые, окрашены в темно-фиолетовый, темносиний или черный цвет, нередко разрушены - на их месте образуются вакуоли.

Эозинофилы (Э) - крупные округлой формы клетки диаметром 9-22 10’ 3 мм. Ядро окрашено в фиолетовый цвет. Цитоплазма нежно-голубая с розово-красной или ярко-красной зернистостью (гранулы круглые или слегка овальные). Характер ядра зависит от степени зрелости клетки: у зрелых форм ядро сегментировано, у молодых округлое. У лошадей, крупного рогатого скота и свиней ядро чаще состоит из двух сегментов, а у овец, коз и собак - из трех. Наиболее крупные гранулы встречаются в цитоплазме эозинофилов у лошадей (до 3 10" 3 мм), собак и кроликов

(до 1,5 10мм); у кошек гранулы расположены очень густо, нередко они палочковидной формы и неодинаковых размеров. При растворении гранул на их месте образуются вакуоли, в раздавленных клетках гранулы лежат свободно, «рассыпавшись».

Нейтрофилы (Н) - клетки округлой формы, размером 9,5- 14,5 · 10" 3 мм. В зависимости от формы и степени окраски ядра различают миелоциты, юные (метамиелоциты), палочкоядерные и сегментоядерные нейтрофилы.

Миелоциты (М) - наиболее молодые клетки с неравномерно окрашенным в фиолетовый цвет массивным круглым или овальным ядром, расположенным чаще эксцентрично. Для ядерного хроматина характерно чередование темных и светлых участков. Цитоплазма клеток розового или светло-синего цвета, с мелкой нежной розовой зернистостью. В крови здоровых животных миелоциты не встречаются.

Юные (Ю) нейтрофилы содержат окрашенное в фиолетовый цвет ядро: широкое с центральным вдавлением (бобовидной формы) или немного вытянутое (подковообразное). Светлые участки хроматина сменяются более темными. Цитоплазма розового цвета, иногда плохо прокрашена, с мелкой, нежной розовой зернистостью. В периферической крови взрослых животных юные нейтрофилы не всегда удается обнаружить.

Палочкоядерные (Я) нейтрофилы характеризуются трансформацией ядра в колбасовидную или палочковидную форму. Ядро неравномерно окрашено в темно-фиолетовый цвет; приблизительно одного диаметра по всей длине, но может быть изогнуто в виде дужки, полумесяца, латинской буквы S, на концах булавовидно вздуто; в отдельных местах на ядре заметны небольшие перехваты-мостики шириной не менее */ 2 основной части ядра. Цитоплазма бледно-розового цвета, с азурофильной зернистостью, содержит множество мелких (часто плохо видимых), равномерно расположенных гранул.

Сегментоядерные (С) нейтрофилы отличаются от палочкоядерных лишь характером ядра, которое состоит из двух - пяти сегментов, соединенных тонкими, иногда едва заметными перемычками. Ядро окрашивается неравномерно в темно-фиолетовый цвет.

Лимфоциты (Л) по размеру подразделяют на малые (6-9 · 10’ 3 мм), средние (10-14 · 10" 3 мм) и большие (14 · 10~ 3 мм и более). Доминирующий компонент лимфоцита - ядро округлой или слегка овальной формы, интенсивно окрашенное в темно-синий цвет. Хроматин распределен таким образом, что более темные участки переходят без резкой границы в более светлые. Цитоплазма светло-синяя, обычно с перинуклеарной зоной (просветление вокруг ядра), иногда в ней выявляют азурофильную зернистость. Больше всего в периферической крови обнаруживают малые лимфоциты (до 95 %), у которых цитоплазма расположена в виде узкого ободка, или «серпа», вокруг темноокрашенного ядра.

Моноциты (М) - это крупные клетки диаметром 12-24· 10’ 3 мм, округлой или нередко неправильной формы. Ядро характеризуется разнообразием формы: может быть бобовидным, округлым, многолопастным, подковообразным; окрашивается неравномерно в слабофиолетовый цвет с темно-фиолетовыми пятнами, так как хроматин ядра рыхлый, распределен неравномерно, как бы образуя ячейки разных размеров и формы. Цитоплазма моноцитов серо-голубого, серо-синеватого цвета со светлым фиолетовым оттенком, вблизи от ядра содержит мелкую пылевидную зернистость.

Особенности клеток крови птиц. У всех птиц в отличие от млекопитающих эритроциты овальной (эллипсоидной) формы, по размеру больше лейкоцитов, содержат ядро. Тромбоциты веретенообразной формы и тоже содержат ядро. Среди лейкоцитов выделяют псевдоэо- зинофилы, которые соответствуют нейтрофилам млекопитающих. Цитоплазма псевдоэозинофилов содержит крупные красного цвета гранулы в виде зерен или палочек; ядро окрашено в сине-фиолетовый цвет. У истинных эозинофилов гранулы округлой формы и неодинаковые по размерам, розового цвета; ядро состоит из двух - пяти сегментов, окрашивается в темно-сине-фиолетовый цвет более интенсивно, чем у псевдоэозинофилов.

Выведение лейкограммы (лейкоцитарной формулы). Лейкограмма представляет собой процентное соотношение между отдельными видами лейкоцитов в крови.

Методы дифференциального подсчета лейкоцитов. Лейкограмму выводят по окрашенным мазкам в иммерсионной системе путем дифференциального подсчета 100 (лучше 200) лейкоцитов одним из приводимых далее методов (рис. 7.11).

Четырехпольный метод (по Шиллингу): с каждой стороны мазка в начале и в конце его (т.е. на четырех исследуемых участках) определяют по 25 лейкоцитов (или по 50, если считают 200 клеток). При этом от края мазка углубляются на три-четыре поля зрения, затем продвигаются на два-три поля вдоль мазка и возвращаются к его краю. Каждый найденный лейкоцит регистрируют на 11-клавишном счетчике.

Рис. 7.11.

1 - четырехпольный; 2 - трехпольный; 3 - однопольный; 4 - ступенчатый

Трехпольный метод (по Филиппченко): клетки подсчитывают на трех участках, расположенных поперек мазка (от одного края до другого). В начале мазка подсчитывают 35 (или 70) лейкоцитов, в середине 30 (или 60) и в конце мазка 35 (или 70) клеток.

Однопольный метод (по Мухину): подсчитывают 100 лейкоцитов в средней части мазка, проходя поперек его от одного края до другого и обратно.

Ступенчатый метод: подсчет клеток начинают от одного края и ведут по зигзагообразной линии к концу мазка. Выводить лей- кограмму этим способом рекомендуют у крупного рогатого скота при диагностике лейкозов.

При записи результатов отдельные виды лейкоцитов располагают в такой последовательности: базофилы (Б), эозинофилы (Э), нейтрофилы - миелоциты (М), юные (Ю), палочкоядерные (П), сегментоядерные (С), лимфоциты (Л), моноциты (М). Лейкограмма крови здоровых животных представлена в табл. 7.3.

Для дифференциального подсчета лейкоцитов можно использовать такие приборы, как «Техникой», Hemalog В (Н-В), «Культер» модель ВИГ-3.

Таблица 7.3

Лейкограмма крови здоровых животных, %

				Нейтрофилы
животного

* Псевдоэозинофилы.

Определение абсолютного числа отдельных видов лейкоцитов в 1 10 3 мл крови. Сначала необходимо подсчитать лейкоциты и вывести лейкограмму. Затем число лейкоцитов умножают последовательно на процент клеток каждого вида лейкограммы и делят на 100, получая абсолютное количество отдельных форм лейкоцитов в 1 · КГ 3 мл крови.

Например, у коровы в 1 · 10 мл крови определено 8000 лейкоцитов, а в лейкограмме процентное содержание лейкоцитов составляет: Б - 1, Э - 5, П - 4, С - 28, Л - 55, М - 7. Чтобы вычислить содержание лейкоцитов каждого вида в 1 · 10" 3 мл крови, составляют соответствующие пропорции. Для базофилов пропорция будет иметь следующий вид: 100% лейкоцитов - 8000 лейкоцитов; 1% базофилов - X базофилов, откуда х = 1 · 8000: 100 = 80. Таким образом, в 1 · 10‘ 3 мл крови содержится 80 базофилов. Подобным образом определяют абсолютное количество лейкоцитов других видов и получают следующие значения: Б - 80, Э - 400, П - 320, С - 2240, Л - 4400, М - 560.

Изменения лейкограммы. При различных заболеваниях лейкограм- ма у животных может изменяться в трех направлениях: увеличиваться или уменьшаться содержание лейкоцитов отдельных видов (видовые лейкоцитозы и лейкопении - нейтрофилия и ней- тропения, лимфоцитоз и лимфоцитопения, эозинофилия и эозино- пения, моноцитоз и моноцитопения); появляться молодые незрелые формы (нейтрофилии со сдвигом ядра влево); возникать патологические изменения в ядре и цитоплазме лейкоцитов.

Каждый вид лейкоцитоза может быть абсолютным и относительным. Абсолютный видовой лейкоцитоз характеризуется увеличением абсолютного числа лейкоцитов данного вида при нормальном или повышенном общем числе лейкоцитов в крови. Относительный видовой лейкоцитоз сопровождается уменьшением общего числа лейкоцитов и преобладанием в крови лейкоцитов данного вида за счет уменьшения числа других форм клеток, при этом абсолютное число лейкоцитов преобладающего вида остается в пределах нормы.

Нейтрофилия (нейтрофилез, нейтрофильный лейкоцитоз) - увеличение числа нейтрофилов. В клинической практике встречается чаще всего. Одновременно с увеличением процента нейтрофилов в лейкограмме возрастает процент палочкоядерных форм и могут появиться юные нейтрофилы и миелоциты, т.е. происходит ядерный сдвиг «влево» (в лейкограмме эти разновидности нейтрофилов записывают левее сегментоядерных форм). Заметное возрастание процента только сегментоядерных нейтрофилов обозначают как ядерный сдвиг «вправо». Различают четыре разновидности нейтрофилии.

Нейтрофилия с простым регенеративным сдвигом характеризуется увеличением числа палочкоядерных нейтрофилов до 10-13%; процент сегментоядерных клеток при этом в норме или слегка уменьшен; общее число лейкоцитов увеличено незначительно. Наблюдают при хронических и скрытых инфекциях (сап, туберкулез легких), при легкопротекающих острых инфекциях, протозойных заболеваниях, эндокардите, гнойных осумкованных процессах с доброкачественным течением (нагноившиеся раны, местные гнойные очаги).

Нейтрофилия с резким регенеративным (гиперрегенеративным) сдвигом сопровождается появлением в периферической крови юных нейтрофилов и миелоцитов, процент палочкоядерных нейтрофилов также повышен; общее число клеток увеличено. Встречается при острых инфекциях (острый сап, контагиозная плевропневмония, мыт, перипневмония крупного рогатого скота и др.), сепсисе, перитоните, тяжелом фарингите и других септических процессах.

Нейтрофилия с дегенеративным (гипопластическим) сдвигом характеризуется увеличением числа палочкоядерных нейтрофилов, при этом процент сегментоядерных клеток уменьшен; в нейтрофилах наблюдают признаки дегенеративных изменений (бесструктурный характер ядра, наличие токсической зернистости и вакуолей в цитоплазме), появляются атипические клетки. Общее число лейкоцитов в норме или даже уменьшено. Это состояние развивается при длительном и сильном воздействии на кроветворные органы бактерийных токсинов, отравлениях химическими веществами, при тяжелых гельминтозах, гиповитаминозах, кахексии, раке.

Нейтрофилия со сдвигом ядра вправо характеризуется увеличением содержания старых, гиперсегментированных (более пяти сегментов) нейтрофилов при нормальном или незначительно сниженном проценте палочкоядерных форм. Она может быть трех вариантов:

незначительное повышение процента сегментоядерных нейтрофилов на фоне небольшого лейкоцитоза, наблюдаемое после кро- вопотерь, при легком течении инфекций, мышечном напряжении;
увеличение числа сегментоядерных нейтрофилов при нормальном или пониженном числе лейкоцитов, что встречается у старых и истощенных животных;
значительное возрастание числа сегментоядерных нейтрофилов с появлением в них признаков дегенерации при понижении или отсутствии в лейкограмме палочкоядерных форм и выраженной лейкопении, что отмечают при хронических септических процессах, раке, тяжелопротекающих инвазионных заболеваниях. Нейтропения - уменьшение процента нейтрофилов в лейкограмме. Наблюдают в период выздоровления при инфекционных, вирусных болезнях, протекающих с лимфоцитозом (чума свиней, инфекционная анемия). Резко выраженную нейтропению (агранулоцитоз) отмечают при апластических и гипопластических процессах, в результате применения некоторых лекарственных средств (ци- тостатические препараты, используемые при лечении рака, сульфаниламиды, антибиотики и др.), воздействия ионизирующего излучения.

Л имфоцитоз - увеличение (относительное и абсолютное) процента лимфоцитов в лейкограмме - встречается преимущественно при хронических вирусных и бактериальных инфекциях (бруцеллез, туберкулез), хрониосепсисе, интоксикациях, при истощении, анаплазмозе, бабезиозе (пироплазмозе), чуме свиней, стахиботриотокси- козе, хроническом катаре желудка, сильных ожогах кожи, при поражении желез внутренней секреции (сахарный диабет, тиреотоксикоз), в период выздоровления при острых инфекциях, а также при лимфолейкозе.

Лимфоцитопения (лимфопения) - понижение содержания лимфоцитов в крови. Чаще всего лимфопения сопровождает нейтро- филию, что наблюдают при сепсисе (тяжелопротекающие гнойные и септические заболевания), туберкулезе, ботулизме, кровопятнистой болезни, чуме свиней. Устойчивая лимфопения служит одним из важных признаков приобретенного иммунодефицита, для диагностики которого важно также знать общее число лимфоцитов и их субпопуляций - В- и Т-лимфоцитов.

Эозинопения (анэозинофилия) - понижение процента эозинофилов в лейкограмме. Наблюдают при сепсисе, вирусных заболеваниях, бабезиозе (пироплазмозе), интоксикациях, уремии, при апластических состояниях, в стрессовых ситуациях, при В ^-дефицитной анемии, в терминальную стадию лимфолейкоза, а также после применения стероидных гормонов.

Моноцитоз - увеличение процента моноцитов в лейкограмме. Наблюдают при затухании инфекционного процесса, что указывает на благоприятный исход болезни. Моноцитоз может встречаться при нейтрофилиях (сепсисе) и лимфоцитозах с нейтропенией (пиро- плазмидозы, нутталиоз, трипанозамоз) и др., а также при хронической инфекционной анемии, туберкулезе, листериозе, ботулизме, некоторых формах лейкоза, злокачественных новообразованиях, язвенном перикардите.

Моноцитопения - уменьшение процента моноцитов в лейкограмме. Встречается при сильно выраженных нейтрофилиях, вызванных септическими заболеваниями. Полное исчезновение моноцитов считают неблагоприятным прогностическим признаком.

Базофилия - увеличение процента базофилов в лейкограмме. Отмечают при хроническом миелолейкозе, гельминтозах, аллергических состояниях, голодании, чуме свиней, паралитической миоглобинурии.

Лейкоцитарная формула (микроскопия) - это обследование, которое включает в себя подсчет 5 основных видов лейкоцитов (нейтрофилы, лимфоциты, моноциты, эозофилы, базофилы) в периферической крови и их количество в объем сданного пациентом материала. Микроскопия окрашенного мазка крови считается «золотым стандартом» диагностики и имеет большое значение в диагностике заболеваний крови, инфекций, воспалительных процессов. Также применяется для оценки состояния организма перед операционными вмешательствами и эффективности лечения.

Различие микроскопии и аппаратного метода заключается в описании изменений клеточной цитоплазмы и наличия включений в нее. Также ведется описание эритроцитов с фиксацией изменений, а именно:

анизоцитоза,
пойкилоцитоза,
микроцитоза,
макроцитоза,
гипохромия,
гиперхромия и т.п

Метод незаменим в диагностике гематологических заболеваний, так как позволяет обнаружить и описать бласты и юные клетки, заподозрить лейкоз.
Бласты, промиелоциты, миелоциты, метамиелоциты в норме в периферической крови не обнаруживаются.
Нейтрофилы - наибольшая группа лейкоцитов, которая составляет большую половину всех лейкоцитов. При обследовании ведется фиксация наличия в крови двух видов нейтрофилов - палочкоядерных и сегментоядерных. В норме сегментоядерные составляют небольшое колличество среди всей популяции лейкоцитарных клеток.

Базофилы - наименьшая группа лейкоцитов, которая содержит в своей цитоплазме органические вещества - гепарин и гистамин . Базофильные лейкоциты при распаде и дегрануляции способствуют быстрому развитию анафилактического шока организма.

Моноциты - группа крупных лейкоцитов крови, которая участвует в немедленной иммунной реакции на новые факторы и являются предшественниками защитных клеток - макрофагов.

Лимфоциты - группа лейкоцитов, которая несет основные иммунные функции и реагирует на чужеродные объекты, вызывая при этом клеточную и гуморальную реакцию организма. Составляют больше 1/3 всех лейкоцитов.

Плазмоциты или плазматические клетки - составляющая лимфоидной ткани, которая отвечает за выработку иммуноглобулинов. В большинстве случаев они у здорового человека не присутствуют в крови.

Их наличие свидетельствует о развитии вирусных заболеваний (корь, краснуха, различные виды мононуклеоза, гепатиты А, В, С, D , E и другие) в организме, а также при плазмоцитоме, персистенции антигена на протяжении долгого времени. Кроме того, может свидетельствовать о послелучевой болезни, и присутствии новообразований .

При фиксации плазмоцитов в крови результат указывается с расчётом на 100 просчитанных единиц (1/100, 3/100 и так далее).

Подготовка к исследованию

Специальной подготовки не требует. Основными рекомендациями являются:

проведение с утра натощак или в другое время суток, но не ранее чем через 4 часа после употребления пищи.
отсутствие высоких эмоциональных нагрузок или серьезной физической активности.
пауза между другими видами обследования: рентген, УЗИ и т.п.
ограничение проведения всех видов физиотерапии перед диагностикой.

Факторы, влияющие на результат исследования

Несоблюдение правил подготовки к исследованию: получение проб крови не натощак или сразу после других видов обследований.
Чрезмерные физические нагрузки или стресс;
Период беременности.
Приём специфических медикаментов (сульфаниламидов, нестероидных противовоспалительных средств, левомицетина, тиреостатиков, цитостатиков, кортикостероидов, гепарина, леводопа, фенитоина, вальпроевой кислоты, наркотических анальгетиков).

Единицы измерения

Эозинофилы: %

Базофилы: %

Моноциты: %

Лимфоциты: %